廖思聪abc,朱彩玉abc,邬慧贤abc,金俊飞abc
(桂林医学院附属医院a,广西肝脏损伤与修复分子医学重点实验室,上,广西神经鞘脂代谢相关疾病基础研究重点实验室c.中美健康与疾病脂质研究中心,桂林541001)
摘要 目的 探究铁死亡在肝癌细胞对仑伐替尼(Lenva)耐药中的作用,为预防或逆转Lenva 耐药提供新思路。方法 体外培养人肝癌细胞系PLC/PRF/5,即亲本细胞(PC)采用梯度浓度诱导法构建Lenva 耐药细胞(LRC);利用RNA-seq技术对LRC和PC两种细胞进行转录组测序,测序结果进行差异表达基因分析及 KEGG富集分析:采用CCK-8法测定细胞活力,采用免疫印迹检测铁死亡相关蛋白,利用 DHE 探针检测细胞活性氧(ROS),应用透射电镜观察细胞线粒体形态。结果 lenva 处理PC和LRC 24h,半数抑制浓度(IC)分别为24.88umol/L和89.34 umol/L,提示 Lenva 耐药人肝癌细胞体外诱导成功。RNA-seq测序检测到12106个基因,与PC比较,LRC 88 个基因上调,197 个基因表达下调。差异基因的KEGG通路富集分析结果显示,铁死亡信号通路位列其中。利用10umol/LLenva处理细胞48h,与PC相比,LRC铁死亡相关蛋白SLC7A11和GPX4表达增加,ROS含量降低。电镜结果显示,与PC相比,特征性铁死亡线粒体形态改变的LRC 明显减少。结论 肝癌细胞对Lenva 耐药可能涉及多种基因和信号途径,其中铁死亡抵抗机制可能是引起肝癌细胞耐Lenva 的关键。
DOI:10.19296/i.cnki.1008-2409.2024-03-001
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